作者：谭彬, 郭文武
作者单位：华中农业大学
摘要：果实无核对柑橘鲜食具有重要意义，童期长是柑橘等多年生果树育种的重要制约因素，柑橘类植物中短童期种质的发掘为解决该问题提供了便利。本研究以一早实积的实生苗茎段为外植体，利用其童期短(l-2年)、一年可多次开花结果的特性，以根癌农杆菌介导法转入绿色荧光蛋白基因(gfp)，建立早实积转化再生体系。其不定芽再生率和转化率分别为91.8%和20.7%，共获得116个经GFP荧光检测和PCR检测均呈阳性的转基因株系；southem杂交表明15个转基因株系中gfp基因以l-3拷贝插入；Real-time PCR分析表明不同转基因系gfp基因转录水平相对表达量的差异与转基因的拷贝数没有相关性。移入温室l年半后开花的25株转基因植株中，17株开花，8株座果；GFP荧光检测表明GFP可以持续稳定地在T0代花和果实以及T1代实生苗中稳定表达。将拟南芥单性结实基因MAC12.2(澳大利亚CSIRO园艺部Koltunow博士提供)转入早实积，不定芽再生率60.3%，共获得95个经GUS染色和PCR检测均呈阳性的转基因株系；Southem杂交表明所检测的15个转基因株系中外源基因以1-4个拷贝插入。对移入温室1年半的38株转基因植株进行分析，32株开花，其中11株座果；Real-time PCR分析表明MAC12.2基因在不同转基因株系的花器官中均有表达。与对照相比，转基因株系中雌蕊败育花，尤其是畸形花数明显增多，且转基因株系的花粉育性均有不同程度的降低；统计获得成熟果实的5个转基因株系的单果种子数，表明其单果种子数明显少于未转基因对照。为通过基因工程创造柑橘无核新种质，将可以导致种子败育的基因CG1-400-RNase转入有籽商业品种。首先建立了默科特橘橙实生苗上胚轴切段的高效再生体系，利用此体系将CG1-400-RNase基因转入默科特橘橙，共获得5株PCR检测呈阳性的转基因植株，其中3株经Southem杂交检测表明外源基因以双拷贝插入；还将CG1-400-RNase基因分别转入锦橙、红江橙和桃叶橙等有籽地方品种，均获得了PCR检测呈阳性的转基因植株。所有转基因植株在温室生长良好，有望在短期内获得既保留原品种优良品质但种子数明显减少的少核或无核柑橘新种质。
关键词：模式转化, 新种质, 体系建立, 基因工程, 转基因植株, 转基因系, 不定芽再生, 早实积, 实生苗, 童期
文献注录：谭彬, 郭文武. 早实枳模式转化验证体系建立及基因工程创造柑橘无核新种质 [A]. [C] 第二届全国果树分子生物学学术研讨会. .
报/刊名：《》，发表于
文献类型： [A]
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