作者：李政利
作者单位：西南大学
摘要：农业生物技术应用国际服务组织(ISAAA)的统计资料显示,截至2011年,种植转基因作物的国家和地区的数量增加至29个,全球转基因作物年种植面积达到1.6亿hm2,比1996年增长了94倍。目前,国内外上市的转基因生物产品也愈来愈多如：转基因大豆、转基因棉花、转基因玉米、转基因油菜和转基因番茄等,由此引发的安全性问题也引起了人们的广泛关注,如何准确检测和识别转基因作物及其产品,也成为人们关注的热点。 柑桔是世界第一大水果,橙汁是世界第一大果汁饮料。近年来,植物基因工程技术的迅速发展,转基因技术为柑桔品种遗传改良开辟了一条新途径,多个柑桔转基因品种已经进入中间试验阶段。可以预见,在不久的将来,转基因柑桔的商品化将成为必然。因此,开展柑桔产品转基因成分检测研究、建立转基因柑桔产品精准检测技术体系已显得十分必要和迫切。 本研究以中国农业科学院柑桔研究所国家柑桔品种改良中心获得的转基因柑桔为材料,建立了柑桔转基因成分的定性和定量检测体系。主要结果如下： 1.柑桔转基因成分多重PCR定性检测体系的建立 以转基因锦橙为材料,根据GenBank中pB1121质粒序列和柑桔(Citrus.)Actin基因序列,分别设计出CaMV35S启动子、NOS启动子、NOS终止子特异引物和Actin基因的特异引物。通过正交试验确定最佳的引物浓度和比例,PCR反应体系中各因素的浓度及反应程序,建立了能同时检测出四种序列的多重PCR检测体系。该检测体系灵敏度达到了0.1%,理论上已经能满足柑桔及其加工产品的转基因成分检测。 2.转基因柑桔定量检测体系的建立 采用Taqman探针荧光定量PCR技术,建立转基因柑桔中35S启动子转基因成分的定量检测方法。首先,以Actin为内源参照参基因,35S启动子为目标基因,设计特异性引物和探针。用FAM荧光染料基团和Cy5荧光染料基团分别标记Actin基因和35S启动子的特异性探针,然后,建立转基因柑桔多重Taqman荧光定量检测体系,该体系可在一个反应管中同时检测内参基因Actin和35S启动子。最后,根据Actin基因和35S启动子的系列浓度梯度反应的Ct值,做标准曲线,可检测出样品中至少0.5%(w/w)的转基因成分含量,能够满足国际上1%低限要求。 本反应体系,可在1h内完成96个样品的定量分析,在对转基因成分含量为15%-0.75%的柑桔样品进行定量检测,测定值和理论值没有显著差异。
关键词：转基因, 多重PCR, 荧光定量PCR, 柑桔
文献注录：李政利. 柑桔转基因成分精准检测技术研究 [D]. . 2012.
报/刊名：《》，发表于2012
文献类型： [D]
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