作者：文露清
作者单位：湖南农业大学
摘要：柑橘是世界上最重要的水果之一。转基因育种是常规育种的重要辅助手段,成为实现目标性状改良的一种快速、有效的途径。但人们担心标记基因的环境和食品等安全性问题。"Gene-Deletor"技术(外源基因清除技术)是有望解决转基因植物环境安全性和食品安全性问题的有力工具。对于柑橘这类水果,种子是不受欢迎的特性,改良这些品种,实现无核化可提高其市场竞争力。因此,本试验从美国康涅狄格大学李义教授实验室引进的‘'Gene-Deletor"技术和果实无核化技术的相关基因和植物组织特异性启动子,应用于柑橘品种上,建立稳定再生及遗传转化体系,为建立完善的柑橘外源基因清除技术和果实无核化技术打下基础。 本研究采用农杆菌介导法,以"Gene Deletor"技术基因载体及其对照基因载体和果实无核化基因载体分别转入到实生态金柑和成年态冰糖橙中,采用GUS组织染色和PCR等技术进行转基因植株的早期鉴定,以期获得两种技术的柑橘转基因株系。主要研究结果如下： 1.建立金柑实生苗茎段上胚轴切段不定芽的再生体系。结果表明：采用35 d苗龄的无菌苗上胚轴节间茎段,水平放置在MS+N6-苄氨基嘌呤(6-BA)2.0 mg/L+α-萘乙酸(NAA)1.0mg/L+激动素(KT)1.0mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂(pH5.7)再生培养基上,经过3d暗培养,转移至光／暗周期16／8h条件下,为诱导金柑不定芽再生的最佳条件。 2.通过金柑实生态茎段对卡那霉素敏感性试验的分析,在金柑遗传转化中,为获得一定数量的抗性芽,同时又淘汰大量的非转化体,确定卡那霉素筛选浓度为50 mg/L。 3.利用金柑实生苗上胚轴切段和成年态冰糖橙节间茎段进行遗传转化。Gene-deletor技术载体Y-A及及其对照载体C-F,无核技术载体C-D。通过转化金柑实生态节间茎段,GUS染色和PCR进行早期鉴定转化金柑实生态获得的再生抗性芽,结果表明：1株转Y-A,3株转C-D和1株转C-F基因载体抗性植株成功导入目的基因。通过PCR早期鉴定转化成年态冰糖橙节间茎段获得的再生抗性芽试管苗,结果表明：5株转Y-A基因株系成功导入目的基因。
关键词：金柑, 冰糖橙, 再生体系, 遗传转化
文献注录：文露清. “Gene Deletor”技术和果实无核基因转化柑橘的初步研究 [D]. . 2011.
报/刊名：《》，发表于2011
文献类型： [D]
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