作者：李琳洁
作者单位：湖南农业大学
摘要：植物转基因研究中抗性标记基因可以提高转化体的筛选效率。然而，如今可利用的标记基因种类非常的有限，不利于对转基因植物的长期研究。而且人们也对转基因植物的安全性报以怀疑，阻碍了转基因植物研究的发展。在剔除标记基因策略中，可诱导的自主剔除途径显现出较好的利用前景。柑橘溃疡病是一种世界性的检疫性病害，对产业危害极大，因缺乏抗病资源和有效防控方法，该病仍无法根除。pthA-NLS基因具有抑制病原菌致病因子的功能，将其构建入这种化学诱导剔除载体，旨在以柑橘为受体，从抗溃疡病转pthA-NLS基因植物中剔除标记基因。本研究的结果如下： 1.本试验以实生态糖橙为试材，采用了一个结合化学诱导系统XVE和位点专一性重组系统Cre/LoxP的标记基因剔除载体对柑橘进行无标记转基因的研究，研究结果表明此化学诱导切除标记基因系统在柑橘上是可行的，并初步建立了一套有效的柑橘无标记转基因体系。通过荧光显微镜能成功观察到了绿色荧光蛋白的表达后，进行试管嫁接，30 d后，提取接穗基因组DNA进行PCR扩增，检测到标记基因的完全切除。 2.将pthA-NLS基因置换掉gfp报告基因，构建入p35S-gfp载体的XhoI与SpeI位点中，成功构建了柑橘溃疡病pthA-NLS基因无标记转化载体。 3.将p35S-NLS载体利用农杆菌介导法转化甜橙实生苗节间茎段，经目的基因特异性引物XhoIF和SpeI对转化苗进行PCR检测，获得了27株转基因大红甜橙。利用P1，P2和P4三条引物进行多重PCR检测，没有检测到重组现象的发生。将已确定为转基因的试管嫁接苗转移至含有6μM-雌二醇的诱导液体培养基中，继续进行诱导。一个月后对其进行RT-PCR检测，发现部分重组切除现象的发生。
关键词：化学诱导切除标记基因系统；柑橘溃疡病；pthA-NLS；甜橙
文献注录：李琳洁 . 柑橘无标记转基因技术体系的建立及应用初探 [D]. . 2010.
报/刊名：《》，发表于2010
文献类型： [D]
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