作者：徐海峰
作者单位：福建农林大学
摘要：柑桔是世界上最重要的水果之一，在我国水果产业中占据了重要的经济地位。但是因为柑桔上存在童期过长、多胚性现象、遗传的高度杂合及单性结实等特点，利用常规育种方法受到限制，影响了育种工作的进行。近年来，不断完善的转基因技术为我们提供了一种更加快速直接的育种和品种改良手段。 转基因技术日益成为品种改良的重要手段，并为人类带来巨大收益，但是由于目前大多使用抗生素抗性基因和抗除草剂类基因作为标记基因，对环境和人类健康存在或潜藏着无法评估的不良影响和损害，从而限制了转基因作物在商业生产中的推广利用。目前解决这一问题最有效的方法就是利用无争议的生物安全标记基因。 本研究以福建省优良柑桔品种雪柑(Citrus sinensis Osb．‘Xuegan’)实生苗上胚轴为外植体，建立了高效的再生体系。构建了6-磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因为选择标记的植物表达载体，并通过根癌农杆菌介导的方法，建立了雪柑生物安全标记PMI基因为选择标记的转化系统，为雪柑的品种改良奠定基础。主要结果如下： 1)以雪柑实生苗上胚轴为材料，建立了高效离体培养再生体系。上胚轴纵切结合前期暗培养，在MS附加BA 3 mg•L~(-1)、蔗糖30 g•L~(-1)培养基中，不定芽诱导率为100％，每个外植体平均诱导的不定芽数达33.8；不定芽在1000 mg•L~(-1)IBA溶液中浸泡10 min后，移入1／4 MT(大量元素)+1／2 MT(其它元素)+10 g•L~(-1)蔗糖的液体培养基中，采用滤纸桥法进行培养，生根率达100％，平均根数2.5条；移苗成活率达100％。 2)构建了三个PMI基因为选择标记的植物表达载体：I：pBIPMI，将PMI基因(manA)代替表达载体pBI121上的GUS基因；Ⅱ：pC1301PMI，用PMI基因(manA)取代pC1301上的选择标记基因htp；Ⅲ：pC1301PMI-LFY，将拟南芥花分生组织特性基因LFY构建到以PMI基因(manA)为选择标记基因的表达载体pC1301PMI上。 3)以PMI基因为选择标记雪柑转化体系的建立。经过在含不同甘露糖和蔗糖浓度组合的培养基上试验，最佳选择压为甘露糖25 g•L~(-1)+蔗糖5 g•L~(-1)。试验结果表明，侵染30 min，4 d的共培养时间，1 mg•L~(-1)2，4-D预处理3 h均提高了转化后的再生率。随机挑取抗性植株进行CPR检测，结果表明PMI基因(manA)已经整合到雪柑基因组中并得到表达。本研究初步建立了雪柑遗传转化的甘露糖选择标记系统。
关键词：柑桔；不定根诱导；再生体系；6-磷酸甘露糖异构酶(PMI)；遗传转化；甘露糖
文献注录：徐海峰. 以PMI基因为选择标记雪柑转基因体系的建立 [D]. . 2007.
报/刊名：《》，发表于2007
文献类型： [D]
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