作者：敖小平
作者单位：湖南农业大学
摘要：柑桔常规育种开始于19世纪，但是，由于柑桔存在童期长、杂合性高、种子多胚、遗传上不亲和等现象，常规育种受到限制。生物技术(尤其是组织培养及基因工程技术)帮助育种者有效地克服了传统育种中的各种障碍。同时，遗传转化技术因其不受基因型限制，可以保持品种的完整性，同时可以定向地增加或者删除植物的某个特性，已成为提高柑桔及其他物质品质的非常有吸引力的方法。然而，要获得高效的遗传转化系统，必须建立高效的再生体系。 本试验品种大红甜橙是湖南省地方品种，品质优良，耐贮藏，是鲜食和榨汁的优良选择。前人多次采用rol基因转化园艺作物，尤其是果树的研究结果表明，rol基因具有使植物节间茎段变短、植株矮化及产生大量斜向生长的毛状根等特性。用rolB基因转化大红甜橙在生产上具有较高的应用价值，在理论上对柑桔及其他作物的品种改良也有借鉴意义。本试验通过农杆菌介导法，成功将rolB基因导入大红甜橙。主要研究结果如下: 1、以大红甜橙上胚轴为外植体，研究了影响植株离体再生的主要因素，结果表明:植物生长调节剂对不定芽及不定根的诱导和分化有显著影响。6-BA诱导大红甜橙上胚轴产生不定芽的较佳浓度为1.0 mg•L~(-1)，此时不定芽诱导率为96.96%;IBA和NAA均能促进不定根萌发。然而，NAA同时也诱导产生了过量的愈伤组织;综合考虑，IBA效果比NAA好。当IBA浓度为5.0mg•L~(-1)时，不定根诱导率和平均根数均达到最高，分别为95.0%和1.49根;组培苗移栽时，基质采用河沙:草炭:锯木屑(1:1:1)。移栽后，使幼苗逐步适应外界环境，成活率可达100%。 2、研究了Kan和农杆菌菌液的浓度对抗性芽诱导的影响，建立了大红甜橙较佳的遗传转化体系:MS+1.0 mg•L~(-1) 6-BA+50 mg•L~(-1) Km+500 mg•L~(-1)Cef。抗性芽分别通过嫁接和生根培养，共获得18株抗性植株;通过PCR鉴定，1号，7号，8号、9号、13号和16号为阳性植株;RT-PCR检测证明7号，8号、9号、13号和16号植株的目的基因成功表达;对部分转基因植株进行Southernblot分析，至少有一个拷贝，整合到9号植株的基因组DNA中。 3、对已获得的转rolB基因植株及对照进行了形态特征观测。在嫁接试验中，对照与转基因植株的叶片面积和株高均存在显著差异;对照植株的叶片面积和株高分别是转基因植株的6.14～15.48倍和6.48～9.38倍。生根试验表明，外源激素IBA可促进对照及抗性芽生根，但是，抗性芽对IBA更为敏感，抗性芽远远早于对照开始萌发不定根;无外源激素存在条件下，抗性芽的平均根数(9.0根)远远高于对照平均根数(1.0根)，同时，也比外加IBA情况时，抗性芽的平均根数(3.5根)要高得多。 大红甜橙转rolB基因嫁接植株显著矮化、节间长度缩短的特性，在果树栽培和生产管理应用上意义深远。
关键词：柑桔；大红甜橙；rolB基因；遗传转化；根癌农杆菌
文献注录：敖小平. rolB基因转化大红甜橙的研究 [D]. . 2009.
报/刊名：《》，发表于2009
文献类型： [D]
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