作者：瞿金旺
作者单位：华中农业大学
摘要：柑橘是世界上具有重要经济价值的大宗水果。在柑橘的生产过程中，由于冷害、冻害、盐害等环境胁迫的影响，其果实的产量和品质都会明显的下降，人工栽培管理虽然在一定的程度上减少这些伤害，但成效有限。通过育种手段，选育能抵御环境胁迫的优质新品种，是解决这一问题的根本途径。柑橘的遗传转化以其自身的优势，为柑橘新品种育种提供了一条新的途径。 本研究以9个品种的柑橘胚性愈伤及会钱橘、冰糖橙上胚轴切段为试材，采用根癌农杆菌介导法，将亚精胺合成酶基因，转入柑橘，以判定多胺的超量表达对柑橘生长发育及抗逆境能力的影响，为进一步的抗性育种奠定基础。同时，还对柑橘遗传转化高效再生体系的完善进行了探索。研究结果如下： 1．共获得了11种Km抗性柑橘材料：朋娜脐橙、暗柳橙、意大利血橙、冰糖橙、四季橘、墨西哥来檬以及山金柑等7种Km抗性胚性愈伤组织；默科特橘橙、澳洲指橘以及红马叙葡萄柚等3种Km抗性胚状体以及23株转基因金钱橘并移栽至温室中。 2．发现当共培养培养基pH值为5.4时，以金钱橘上胚轴切段为外植体进行遗传转化获得的抗性芽比率最高。以柑橘胚性愈伤组织为外植体进行遗传转化中，基因型对抗性愈伤获得率影响很大：山金柑、朋娜脐橙以及红马叙葡萄柚较易(大于15％)；暗柳橙、默科特橘橙以及澳洲指橘居中(5～15％)；意大利血橙、四季橘以及墨西哥来檬较难(小于5％)。 3．在形态学上，转基因金钱橘与未转化对照在株形和生长势上差异不明显，但在叶形指数、叶面积、叶色等方面存在微小差异。 4．在经受相同程度的逆境胁迫[(高温(45℃保湿6h)、低温(-6℃冰箱中6h)、高盐(300mmol／L NaCl溶液中6h)以及高渗(20％PEG6000溶液中6h)]下，转基因会钱橘的叶片比未转化对照植株叶片的相对电导率低，转基因植株表现出较强的抗逆性。用1 µmol/L百草枯(Paraquat )处理叶片后，未转化植株叶片中的叶绿素含量下降为未处理前的46.9%，而转基因植株叶片中的叶绿素含量下降较少，仍然能达到相应未处理前的84.3%，转基因植株对由百草枯诱导的氧化胁迫表现出较强的抗逆性。 5.柑橘的离体再生体系的完善和创新方面:冰糖橙上胚轴切段诱导不定芽的试验中，对培养基中添加BA、NAA、蔗糖、AgN03、活性炭等物质对不定芽的萌发率进行了6因子5水平的正交试验研究，得出最适合的生芽培养基配方(MT+2.0mg/L BA + 0.5mg/L NAA + 20g/L蔗糖+8mg/L谷氨酞胺+2.0mg/L AgNO3 + 0%活性炭+5g/L琼脂，pH 5.8 )。在柑橘成年态茎段诱导腋芽的试验中，分别研究了4种不同消毒方式的杀菌效果，经过比较发现，采用2.5% NaClO消毒20min效果最好，污染的芽数量少，而且萌芽情况也很好。将薄细胞层培养技术应用于柑橘的离体再生方面也进行了尝试。
关键词：柑橘；MdSPDS1；根癌农杆菌；遗传转化；多胺；逆境；成年态；薄细胞层培养
文献注录：瞿金旺. 根癌农杆菌介导亚精胺合成酶基因MdSPDS1的柑橘遗传转化及离体再生 [D]. . 2006.
报/刊名：《》，发表于2006
文献类型： [D]
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