作者：宋健坤
摘要：无籽是柑橘的一项优良品质，柑橘三倍体由于染色体减数分裂不正常，配子败育，因此是天然的无籽类型。用异源四倍体体细胞杂种与二倍体杂交是培育无籽三倍体柑橘品种的一条有效途径。本实验旨在用果实性状表现优良的接穗品种融合而来的已开花的几个体细胞杂种与我国的一些优良的地方品种杂交，通过胚挽救技术培育三倍体，希望从中选育出既保持其果实的优良性状，又具有无籽特性的柑橘新品种。主要研究结果如下： 1．2001-2003连续三年，以沙田柚(Citrus grandis(L．) Osbeck ‘Shatian’)、华农本地早橘(C．succosa Hort ‘Huanong’)、中秋橘(C．unshiu Marc．‘Zhongqiu’)、HB柚(C．grandis Osbeck ‘Hirado Buntan’)、国庆4号温州蜜柑(C．unshiu Marc．‘Guoqing No．4’)为母本，用NS(诺瓦橘柚+苏凯瑞甜橙，[C．reticulata Blanco × C．paradisi Macf．] ‘Nova’ +C．sinensis(L．) Osbeck ‘Succari’)、NH(诺瓦橘柚+HB柚，[C．reticulata Blanco × C．paradisi Macf．] ‘Nova’ + C．grandis (L．) Osbeck ‘Hirado Buntan’)、SH (苏凯瑞甜橙+HB柚，C．sinensis(L．) Osbeck ‘Succari’ + C．grandis(L．) Osbeck ‘Hirado Buntan’)、VM(伏令夏橙+默科特橘橙，C．sinensis(L．) Osbeck ‘Valencia ’+ [C．sinensis(L．) Osbeck × C．unshiu Marc．] ‘Murcott’tangor)、HD(哈姆林甜橙+丹西橘，C．sinensis ‘Hamlin’+C．reticulata ‘Dancy’)体细胞杂种的花粉授粉，在授粉后3个月对柑橘幼胚进行胚挽救，一共得到了10个组合的288株三倍体和10株四倍体，最后有172株三倍体和4株四倍体单系移栽成活。这些杂交组合中，以2002年沙田柚×NS组合的胚挽救最为成功，从225株植株中获得了184株三倍体，127株移栽成活。这些植株是我国首次批量具有接穗品种潜力的三倍体植株，为三倍体无籽品种的选育奠定了基础。 2．2002年在对沙田柚×(Nova橘柚+Succari无酸甜橙)组合进行胚挽救的过程中，从胚状体周围和植株的下胚轴处长出了愈伤组织。通过细胞流式仪和染色体观察，发现所获得的愈伤组织都是三倍体；用TAA1和TAA27两对SSR引物进行鉴定，表明它们都是双亲杂种；这些愈伤组织在不加任何激素的MT基本培养基上继代保存两年后，在MT+乳糖(50g•L-1))培养基上仍具有较强的胚状体发生能力。由于愈伤组织中包含了沙田柚的遗传背景，这对沙田柚种质资源的利用和保存都具有重要价值。 3．用SSR引物TAA1、TAA27和TAA33分别对本地早橘×NS、HB柚×NS和中秋橘×NS 3个组合的三倍体和四倍体后代进行了杂种鉴定。除了本地早橘×NS组合中有两株无法确定是杂种外，其他都可以确定是杂种。用叶绿体SSR引物NTCP9对本地早橘×NS和中秋橘×NH两个组合的胞质遗传行为进行了研究，结果表明两个组合的杂交后代都只与母本的带型一致，说明柑橘胞质基因与其它绝大多数植物种类一样，遵循母系遗传的特性。用TAA1和TAA3两对SSR引物对沙田柚×NS组合的父母本和79个后代单株的遗传规律进行了研究，对子代群体中出现的带型和分离情况进行了推导和解释，发现子代带型分别符合4:1:1:5:1和2:2:1:1的分离比例，与推导的双二倍体的分离比例相吻合，说明体细胞杂种的减数分裂行为可能类似于双二倍体。4.对6个杂交组合后代及其亲本的本叶和冀叶的叶形指数以及本叶的叶片厚度进行了调查，结果并没，大部分组合的杂交后代本叶的叶形指数比两个亲本都小，叶片厚度和冀叶叶形指数均居于两个亲本之间；对沙田柚×N和本地早橘×NS两个组合的气孔进行了观察，发现杂种后代气孔的大小和密度也都介于双亲之间。这些形态学的变化与前人关于多倍体的形态变化趋势基本一致。5.从本课题组以前获得的三倍体植株本地早橘×（哈姆林+粗柠檬）的结果树上获得了10个果实，发现里面有46颗饱满籽和瘪籽，对其进行胚挽救，获得了42棵植株，用细胞流式仪进行倍性检测发现其中的倍性比较复杂，有14棵三倍体，10棵二倍体和1棵四倍体。初步推断，三倍体可能是珠心胚发育来的，二倍体和四倍体的来源还有待证明。
关键词：柑橘,三倍体,杂交育种,无籽,SSR标记,细胞流式仪
文献注录：宋健坤. 柑橘三倍体种质资源的创造及遗传分析 [D]. . .
报/刊名：《》，发表于
文献类型： [D]
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