作者：李孟娇
作者单位：浙江农林大学
摘要：果实特异启动子在利用转基因技术改良果实品质性状中起着至关重要的作用，分离柑橘果实成熟特异启动子并分析其功能对揭示果实成熟的分子机制以及利用生物技术提高果实品质均有十分重要的意义。但是目前关于柑橘果实成熟特异启动子的研究报道较少，本研究在前期获得柑橘果实成熟特异基因的基础上，利用Genome Walking技术分离了该基因的5’上游启动子区域，并通过生物信息学软件分析预测其功能元件；构建了三个不同启动子功能区域驱动intron-GUS表达载体，并通过瞬时表达体系初步研究分析了不同启动子区域在柑橘各组织器官中的表达调控，为该启动子功能的进一步深入分析和利用提供依据。主要结果如下： （1）应用Genome Walking技术分离获得了柑橘CsPMEI-InvI基因5’上游启动子序列。生物信息学分析表明，该启动子基因全长为1159bp，CsPMEI-InvI基因5’上游序列含有13个CAAT-box、18个TATA-box、11种与光反应有关的作用元件、厌氧诱导顺式作用元件、缺氧特异诱导增强子元件、生物钟调控顺式作用元件、干旱反应中肌红蛋白的结合位点、低温反应顺式作用元件、与茉莉酸反应有关的顺式作用元件、胚乳表达的顺式作用元件、水杨酸反应顺式作用元件以及8个功能未知的功能元件共30种不同的功能元件，由此推测CsPMEI-InvI基因启动子序列具备了启动子的基本结构和功能，为柑橘果实成熟特异基因CsPMEI-InvI的启动子区域。 （2）为构建适于瞬时表达的植物表达载体，本研究选择了含有iGUS（intron-GUS）基因的pCambia1301为基础载体，iGUS基因在农杆菌中不表达，避免了农杆菌污染对植物瞬时表达研究造成的干扰。根据5’上游区域初步分析结果，设计特异引物，分别克隆了三个不同启动子区域片段，并将其替换pCambia1301中的CaMV35S组成型启动子，构建成pLZ25、pLZ26、pLZ27表达载体。 （3）应用农杆菌介导建立GUS染色瞬时表达体系，以金柑不同组织器官为材料，初步分析不同启动子区域调控作用。根据染色结果初步断定，该启动子区域具有较强的果实表达特性，有待于通过转基因技术进行进一步的验证。
关键词：柑橘,柑橘果实特异启动子,intron-GUS表达载体,瞬时表达
文献注录：李孟娇. 柑橘果实成熟特异启动子的分离与功能初步分析 [D]. . 2013.
报/刊名：《》，发表于2013
文献类型： [D]
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