作者：胡春华
作者单位：湖南农业大学
摘要：果树矮化栽培可降低生产成本，提高生产效益。果树的矮化途径有多种，但其中最有效的为矮化砧木的应用。柑橘目前还没有一个有效的矮化砧木可在生产中应用，因此，矮化砧木的选育一直是柑橘砧木育种的主要目标之一。枳橙[C.sinensis(L.)Osb×Poncirus trifoliate(L.)Raf.]是甜橙与枳的杂种，是世界各柑橘生产国广泛应用的砧木，继承了枳壳抗脚腐病、抗衰退病的特性，并具有耐旱、耐寒、耐贫瘠，对土壤适用性强、与大多数商用品种亲和力强等特征。但生长势比枳壳强，对接穗品种矮化效果不理想。矮化基因rol是从发根农杆菌中的Ri质粒上的T-DNA上分离出来，转rol基因植物均能明显地改变生长习性，特别是矮化性状突出，把矮化基因导入枳橙，可望选育出矮化优良砧木。本试验在前期获得转基因rol枳橙三个无性系(B、D、E)的基础上，对其高接植株进行了分子鉴定、田间形态学观测、繁殖技术以及砧木矮化试验进行了研究，主要研究结果如下: 1.通过提取转基因及对照高接植株叶片总DNA，对B、D、E三个转化系分别用rolA、B、c和nptⅡ基因的特异性引物进行了PCR检测。试验结果显示，各转化系高接植株叶片总DNA都扩增出特异性条带，与携带rolABC基因的质粒DNA阳性对照扩增出的特异条带一致，而对照植株叶片DNA没有扩增出相应的条带，初步鉴定rolA、B、C及nptⅡ组合基因己成功转入到三个转化枳橙系中。 2.通过提取转基因及对照高接植株同龄叶片、组织培养试管苗叶片及根系总RNA，采用PT-PCR技术分析。结果表明，nptⅡ和rolC能在枳橙基因组中正常表达，但rolA和rolB两基因采用该技术未能检测到其表达信息。 3.对高接转基因植株的田间形态学观测及重要生理指标测定结果表明:①转基因B、D、E系枳橙表现出顶端优势减弱，侧枝增多，植株矮化性状明显，高度是对照植株的44%～50%;②节间长度为对照的39%～40%，叶面积减少为对照植株叶片的30%左右;③光合作用增强;④Rol基因改变了内源赤霉素、生长素、玉米素、脱落酸在枳橙体内的含量及分布，赤霉素、生长素、玉米素等促进类激素在中部、下部叶片含量，均高于对照，Rol基因矮化的机理可能是增加转化植株下部的赤霉素含量，提高体内活性态细胞分裂素水平。 4.建立了转rol基因枳橙组培快繁技术体系。通过对转rol基因枳橙B、D、E系及对照的高接植株春梢茎段进行萌芽诱导、增殖及试管苗生根成苗的试验，摸索出枳橙快速繁殖各技术环节适宜培养基、生长调节剂种类及浓度和培养条件。试验结果表明，以MS附加6-BA 1 mg•L~(-1)的培养基适合于枳橙芽的萌发。
关键词：rolABC基因；分子鉴定；RT-PCR；枳橙；矮化砧木；组织培养
文献注录：胡春华. 转rol基因枳橙分子鉴定、形态学观测及繁殖技术研究 [D]. . 2005.
报/刊名：《》，发表于2005
文献类型： [D]
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