作者：张雪寒,何孔旺,茅爱华,周俊明,俞正玉,温立斌,倪艳秀,郭容利,吕立新
摘要：【目的】克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性。
【方法】选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达。选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性。选用HEp-2细胞进行粘附和粘附抑制试验,通过光镜、电镜和荧光显微镜进行观察。选用Balb/c小鼠进行免疫试验。
【结果】成功获得高效表达重组Tir蛋白,并制备了兔源Tir多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与Tir发生特异性抗原抗体反应。表达Tir蛋白能够抑制O157:H7对HEp-2细胞的粘附和A/E损伤。二免后Balb/c小鼠保护率高达75%以上。
【结论】在大肠杆菌中成功克隆表达了Tir基因,所获重组Tir蛋白具有良好的抗原性,可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究。
关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7;转位紧密素受体;表达;粘附;A/E损伤;免疫保护;
文献注录：张雪寒,何孔旺,茅爱华,周俊明,俞正玉,温立斌,倪艳秀,郭容利,吕立新. 肠出血性大肠杆菌O157:H7Tir基因的克隆、表达及生物学活性研究 [J]. 中国农业科学. 2010, 12: 2570-2577.
报/刊名：《中国农业科学》，发表于2010 / 第 12 期。
文献类型： [J] （文献级别：核心刊物）
页码：第 2570-2577 页 / 共8 页