作者：赵彤,于荣,黄丛林,王永勤,张秀海,吴忠义
摘要：【目的】验证高羊茅叶绿体表达载体在高羊茅叶绿体中的瞬时表达情况,为今后在高羊茅叶绿体中稳定表达该载体,获得耐旱高羊茅的叶绿体转基因株系奠定基础。
【方法】首先从高羊茅草叶绿体基因组中克隆16S/trnI-trnA/23S片段,作为定点整合同源片段。然后将耐旱相关基因酵母海藻糖合酶基因tps1与水稻叶绿体16SrRNA基因的强启动子Prrn、烟草叶绿体基因psbA的终止子构建表达盒(Prrn-tps1-TpsbA-ter),连同草丁膦抗性基因bar表达盒、卡那霉素抗性基因nptII和绿色荧光蛋白基因gfp构建的融和基因表达盒一起克隆到定点整合同源片段之间,构建高羊茅叶绿体的稳定表达载体gTKGB。通过基因枪轰击法将gTKGB转化到高羊茅幼嫩叶片中,用激光共聚焦扫描显微镜对GFP的表达情况进行检测分析。
【结果】克隆的高羊茅叶绿体基因16S-trnI-trnA-23S在NCBI登录号为:DQ490947-DQ490950。构建的叶绿体表达载体gTKGB转化高羊茅幼嫩叶片,在叶绿体中有很好的GFP表达。
【结论】高羊茅叶绿体表达载体gTKGB可用于高羊茅叶绿体转化。
关键词：高羊茅;叶绿体表达载体;定点整合;重叠延伸PCR法;瞬时表达;GFP荧光;
文献注录：赵彤,于荣,黄丛林,王永勤,张秀海,吴忠义. 高羊茅叶绿体表达载体构建及绿色荧光蛋白基因瞬时表达检测 [J]. 中国农业科学. 2009, 03: 1116-1122.
报/刊名：《中国农业科学》，发表于2009 / 第 03 期。
文献类型： [J] （文献级别：核心刊物）
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