作者：刘俊,王琴,范学政,徐璐,赵启祖,黄伟,汤波,沙莎,周远成,陈蕾,邹兴启
摘要：【目的】建立一种快速、敏感、特异地检测猪瘟病毒野毒的一步TaqMan-MGB荧光定量PCR方法,为临床鉴别猪瘟野毒和HCLV疫苗毒提供了准确可靠的工具。
【方法】在猪瘟病毒基因组5′端非编码保守区设计一对猪瘟病毒通用引物和一条特异性MGB探针,通过优化,得到最佳反应体系和反应条件,进行特异性、灵敏度和临床样本符合检验。
【结果】该方法在100～10-7范围内线性相关系数为0.998,检测极限达5.3×10-2pg病毒核酸;对24个质控样本检测结果显示,该方法能检测除猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)以外的猪瘟流野毒株,其它猪相关致病病原检测阴性;对122份疑似猪瘟样本检测的结果与本实验室建立的RT-nPCR方法的符合率为94.3%(115/122),阳性和阴性符合率分别为86.4%(38/44)和98.7%(77/78),Kappa值为0.87>0.75【。结论】建立的一步TaqMan-MGB荧光定量PCR方法能鉴别猪瘟野毒和HCLV疫苗毒,且特异性好、灵敏度高、与笔者先前建立的RT-nPCR方法对临床样本的检测结果具有高度的一致性。
关键词：猪瘟;荧光定量PCR;TaqMan-MGB;兔化弱毒疫苗;
文献注录：刘俊,王琴,范学政,徐璐,赵启祖,黄伟,汤波,沙莎,周远成,陈蕾,邹兴启. 猪瘟病毒野毒株TaqMan-MGB荧光定量PCR鉴别方法的建立与应用 [J]. 中国农业科学. 2009, 12: 4366-4371.
报/刊名：《中国农业科学》，发表于2009 / 第 12 期。
文献类型： [J] （文献级别：核心刊物）
页码：第 4366-4371 页 / 共6 页