作者：王玉荣,张雪妍,刘传亮,陈亚娟,李付广
摘要：【目的】构建二倍体亚洲棉石系亚1号全生育期均一化全长cDNA文库,建立亚洲棉功能基因组学研究基础平台,发掘亚洲棉发育、抗逆等相关基因。
【方法】取石系亚1号子叶期、苗期、蕾期、花铃期不同组织器官,提取总RNA并分离纯化mRNA,采用SMART技术反转录全长双链cDNA。用DSN(duplex-specificnuclease)法对全长双链cDNA进行均一化,均一化的cDNA连接到λZAPⅡ载体,包装蛋白包装后构建石系亚1号全生育期均一化全长cDNA文库。
【结果】初级文库滴度4×106pfu·ml-1,库容2×106个独立克隆,重组率大于95%,插入片段平均长度大于1.5kb。随机挑取192个克隆进行EST(expressedsequencetags)测序,冗余度仅为3.49%。BLASTN比对结果显示:78.31%的EST为新EST。
【结论】文库均一化效果良好,质量符合要求,可能包含大量新基因,是进行EST测序、发掘新基因等棉花功能基因组学的研究平台。
关键词：亚洲棉;全生育期;均一化;cDNA文库;EST;
文献注录：王玉荣,张雪妍,刘传亮,陈亚娟,李付广. 亚洲棉(Gossypium arboreum L.)全生育期均一化全长cDNA文库的构建和鉴定 [J]. 中国农业科学. 2009, 04: 1158-1164.
报/刊名：《中国农业科学》，发表于2009 / 第 04 期。
文献类型： [J] （文献级别：核心刊物）
页码：第 1158-1164 页 / 共7 页