作者：王方昆,袁秀芳,王一成,张存,徐丽华,刘思当
摘要：【目的】对H9N2亚型猪流感病毒NS1(nonstructural protein1)基因进行原核表达,获得纯化表达产物,以期为检测猪流感抗体的ELISA试剂盒的研制奠定基础。
【方法】采用RT-PCR扩增了猪流感病毒(H9N2)的NS1基因,将其克隆于表达载体pET-28a(+)上构建成重组质粒pET-NS1,转化受体菌E.coliBL21-DE3感受态细胞,经酶切鉴定及序列分析,筛选出正确重组质粒转化子。
【结果】经终浓度5mmol·L-1乳糖诱导,SDS-PAGE电泳结果显示,重组蛋白NS1得到大量表达,分子质量约为26kD。经Western-blotting分析,表达蛋白能与阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应;ELISA检测显示,在被检血清稀释1280倍时,阳性血清的OD650值大约是阴性血清的3倍,差异明显。
【结论】重组蛋白NS1表达量高,易于纯化并且具有良好的血清学反应的特异性。
关键词：猪流感病毒;NS1基因;反应原性;
文献注录：王方昆,袁秀芳,王一成,张存,徐丽华,刘思当. H9N2亚型猪流感病毒NS1基因的克隆表达及反应原性分析 [J]. 中国农业科学. 2008, 02: 587-592.
报/刊名：《中国农业科学》，发表于2008 / 第 02 期。
文献类型： [J] （文献级别：核心刊物）
页码：第 587-592 页 / 共6 页