作者：骆学农,郑亚东,窦永喜,郭爱疆,侯俊琳,景志忠,才学鹏
摘要：【目的】获得不同发育阶段基因联合表达的具有良好免疫保护性的重组抗原,为研制高效的猪囊虫基因工程疫苗奠定基础。
【方法】PCR扩增截去45W-4B基因的信号肽和C端17个疏水氨基酸序列,经BamH I和EcoR I酶切后与表达载体pGEX-4T-1连接转化BL21感受态细胞,酶切及PCR扩增鉴定阳性克隆。测序正确的质粒经EcoR I和Not I酶切处理后与截去信号肽的18 kD基因连接,构建双基因融合表达载体pGEX-4BX/18。用IPTG诱导的表达产物,进行SDS-PAGE电泳、Western blot分析活性。分别用300μg重组GST-4BX、GST-4BX/18蛋白免疫猪,间接ELISA测定抗体水平。感染后90 d剖检计算各组的减虫率,比较评价重组抗原的免疫保护性。
【结果】4BX/18 kD在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物为50 kD的融合蛋白,并能被人囊虫和感染初期的猪囊虫阳性血清所识别。重组抗原免疫猪后45 d抗体达到峰值,联合表达重组抗原的减虫率为97%,GST-4BX免疫组的减虫率为95%。
【结论】重组抗原4BX和4BX/18kD均具有较好的免疫保护效果,有望利用它们研制出抗猪囊尾蚴病的高效疫苗。
关键词：猪带绦虫;45W-4BX;18kD;联合表达;免疫保护性分析;
文献注录：骆学农,郑亚东,窦永喜,郭爱疆,侯俊琳,景志忠,才学鹏. 猪带绦虫不同阶段45W-4BX和18kD基因联合表达及保护性分析 [J]. 中国农业科学. 2007, 02: 385-390.
报/刊名：《中国农业科学》，发表于2007 / 第 02 期。
文献类型： [J] （文献级别：核心刊物）
页码：第 385-390 页 / 共6 页