作者：杨秋峰,蒋蔚,刘永杰,陆承平
摘要：【目的】构建一个适于嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)的基因打靶载体,并分析转化四膜虫的特性。
【方法】以嗜热四膜虫组蛋白H4-I基因作为启动子,利用H4-I基因的5′和3′侧翼区作为同源臂,并且保留H4-I基因编码区的起始密码子ATG和终止密码子TGA,中间嵌入巴龙霉素抗性标记基因neo,从而构建一个基因打靶载体。将该载体电击转化到嗜热四膜虫接合株体内,使其同源重组到四膜虫H4-I基因上。通过巴龙霉素抗性筛选、PCR扩增目的基因对抗性虫株进行鉴定。光学和电子显微镜观察抗性虫株形态变化。
【结果】成功构建了一个适于嗜热四膜虫的基因打靶载体,将其电击转化到四膜虫体内,抗性虫株的生长速度明显高于普通四膜虫,显微镜观察抗性虫株形态变小,大约是正常形态的1/20～1/30,抗性虫株表面光滑,未见纤毛。
【结论】利用基因打靶载体将neo基因定向整合到四膜虫H4-Ⅰ基因内部,为今后在嗜热四膜虫体内表达外源蛋白奠定了基础。
关键词：嗜热四膜虫;基因打靶载体;H4-Ⅰ;neo;同源重组;
文献注录：杨秋峰,蒋蔚,刘永杰,陆承平. 四膜虫基因打靶载体的构建及其在虫体内的转化 [J]. 中国农业科学. 2007, 12: 2876-2881.
报/刊名：《中国农业科学》，发表于2007 / 第 12 期。
文献类型： [J] （文献级别：核心刊物）
页码：第 2876-2881 页 / 共6 页