作者：吴绍强,蒋金书,刘群,朱引洁
摘要：球虫子孢子表面抗原TA4(25kD)是通过二硫键连接8和17kD 2条多肤形成的,在孢子化后期合成。E.tenella BJ株的TA4基因同国外株的同源性为99％。本试验进行了TA4基因的原核融合表达,并对表达蛋白的SDS-PAGE电泳特性进行探究。试验发现,以pGEX-KG为载体,用IPTG可诱导TA4基因在E.coli BL21(DE3)中的表达。SDS-PAGE表明,融合蛋白大小约43 kD,而非推测的51 kD,诱导6 h的蛋白表达量即可达到较高水平,表达量约为31％。采用抗GST抗体进行Western blotting,成功检测到了特异性条带。说明SDS-PAGE前的样品煮沸处理可使连接TA4 2条多肽的二硫键断裂,只有17 kD的多肽可与26 kD GST蛋白结合。样品采用反复冻融法处理,加入还原型谷胱苷肽后,采用GST凝胶回收柱Sepharose 4B纯化的融合蛋白主要为51 kD的单一条带,煮沸变性后电泳,则43 kD带含量增加。说明纯化过程可影响GST-TA4融合蛋白的特性。
关键词：柔嫩艾美耳球虫;抗原;TA4;SDS-PAGE;Western blotting;
文献注录：吴绍强,蒋金书,刘群,朱引洁. 柔嫩艾美耳球虫BJ株TA4基因的表达及电泳分析 [J]. 中国农业科学. 2004, 08: 1217-1221.
报/刊名：《中国农业科学》，发表于2004 / 第 08 期。
文献类型： [J] （文献级别：核心刊物）
页码：第 1217-1221 页 / 共5 页