作者：王慧,朱瑞良,谭燕玲,魏凯,王新建,孙振红,盛鹏程
摘要：【目的】建立快速检测奇异变形杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌3种食源性致病菌的多重PCR方法。
【方法】根据奇异变形杆菌尿素酶合成的正向调节因子R基因(ureR)、沙门氏菌侵袭性抗原保守基因(invA)和单核细胞增生李斯特氏杆菌编码溶血素O(LLO)的hlyA基因,分别设计3对特异性引物,对单基因PCR和单管多重PCR扩增的特异性、敏感性分析以及建立L16(43)正交试验对单管多重PCR扩增条件,如引物浓度、Tm值、模板量等的优化,建立快速检测奇异变形杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌的稳定的单管多重PCR方法。
【结果】针对奇异变形杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌3种食源性致病菌所设计的3对引物分别能扩增出374、724和215 bp的目的条带,具有高度特异性,反应条件优化后,3种目的菌在105 CFU/mL均可同时扩增出较清晰条带(奇异变形杆菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌在104 CFU/mL浓度下仍然可见到条带),比单基因PCR低一个稀释度,并且人工模拟试验和市售食品试验检测结果稳定。
【结论】该方法操作简单、快速、特异性强和灵敏度高,能够实现对奇异变形杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌3种食源性致病菌的快速诊断检测和监控。
关键词：奇异变形杆菌;沙门氏菌;单核细胞增生李斯特氏杆菌;多重PCR检测;
文献注录：王慧,朱瑞良,谭燕玲,魏凯,王新建,孙振红,盛鹏程. 多重PCR检测三种重要食源性致病菌方法的建立及应用 [J]. 中国农业科学. 2011, 11: 2334-2340.
报/刊名：《中国农业科学》，发表于2011 / 第 11 期。
文献类型： [J] （文献级别：核心刊物）
页码：第 2334-2340 页 / 共7 页