作者：刘业兵,张磊,宁宜宝,王琴,范学政
摘要：【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪细小病毒(PPV)环介导等温扩增(LAMP)方法,为诊断猪细小病毒提供准确可靠工具。
【方法】根据GenBank公布的PPV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进程并筛选最佳引物、反应条件,建立了对PPV病毒DNA进行特异扩增的LAMP检测方法,并可通过加入SYBR Green I肉眼判断结果。
【结果】该方法在63℃恒温下作用45min,PPV病毒DNA获得了高效率的特异性扩增;其检出限量为0.23TCID50,敏感性高;在反应结束后加入SYBR Green I肉眼判断结果,与Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致。通过对20份临床样品的LAMP检测与免疫荧光鉴定、PCR方法比对,符合率均为20/20。
【结论】本研究建立的PPV LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏,操作简单、设备要求低的特点,适合用于临床PPV快速检测。
关键词：猪细小病毒;LAMP;检测方法;
文献注录：刘业兵,张磊,宁宜宝,王琴,范学政. 猪细小病毒LAMP检测方法的建立 [J]. 中国农业科学. 2010, 14: 3012-3018.
报/刊名：《中国农业科学》，发表于2010 / 第 14 期。
文献类型： [J] （文献级别：核心刊物）
页码：第 3012-3018 页 / 共7 页