作者：王彦凤,梁燕,金永,王晓晶,郭旭东,王玮,王潇,王志钢,刘东军
摘要：【目的】克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4（thymosinbeta4,Tβ4）基因,构建皮肤特异性表达载体,转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达红色荧光蛋白并可用于核移植的转基因细胞克隆。
【方法】通过RT-PCR克隆Tβ4基因cDNA序列,然后与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成Tβ皮肤特异性表达载体pCDsRed-KT。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。
【结果】克隆了内蒙古白绒山羊Tβ4基因,cDNA全长142bp,其中包含135bp的完整ORF,编码44个氨基酸残基,氨基酸序列与已报道的牛胸腺素β4（NM001002885）同源性为100%。测序显示构建的表达载体pCDsRed-KT中,Tβ4基因正确连接在皮肤特异性启动子KAP6-1下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。PCR检测显示外源KAP6-1启动子和Tβ4基因整合到细胞基因组中,筛选出的转基因细胞高效表达红色荧光蛋白。
【结论】克隆得到内蒙古白绒山羊Tβ4基因并构建成功其真核表达载体,可稳定转染绒山羊胎儿成纤维细胞,为下一步通过核移植方法获得转胸腺素β4基因绒山羊提供了条件。
关键词：内蒙古白绒山羊;胸腺素β4;皮肤特异性表达载体;稳定转染;
文献注录：王彦凤,梁燕,金永,王晓晶,郭旭东,王玮,王潇,王志钢,刘东军. 克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4基因并稳定转染胎儿成纤维细胞 [J]. 中国农业科学. 2010, 21: 4497-4504.
报/刊名：《中国农业科学》，发表于2010 / 第 21 期。
文献类型： [J] （文献级别：核心刊物）
页码：第 4497-4504 页 / 共8 页