作者：李政利, 彭爱红, 邹修平, 何永睿, 姚利晓, 陈善春.
作者单位：中国农业科学院柑桔研究所
摘要：[目的]建立柑橘转基因成分的多重PCR检测体系。[方法]根据GenBank中pBI121质粒序列和柑橘(Citrus.)Actin基因序列,分别设计CaMV35S启动子、NOS启动子、NOS终止子特异引物和Actin基因的特异引物,建立能同时检测出4种序列的多重PCR检测体系,同时通过正交试验确定该体系的最佳引物浓度和比例及PCR反应体系中各因素的浓度及反应程序,并对该方法的灵敏度进行验证。[结果]试验得到的最佳MPCR反应体系为:10×buffer 2.5μl,25 mmol/L MgCl22.0μl;dNTP Mixture(2.5 mmol/L each)2.0μl,10μmol/L的Actin基因、35S启动子、NOS启动子、NOS终止子引物分别加入1.0、1.0、1.5、0.5μl,模板DNA 0.1μg,Taq DNA聚合酶1.25U,加ddH2O至25μl。PCR反应程序为:94℃预变性5 min;94℃30 s,64.1℃45 s,72℃50 s,31个循环;72℃10 min。试验中,经正交优化后的4重PCR反应灵敏度达0.1%。[结论]该研究建立的MPCR检测体系,理论上已能满足柑橘或其深加工产品的转基因成分检测。
关键词：多重PCR, 正交试验, 检测, 转基因成分
文献注录：李政利, 彭爱红, 邹修平, 何永睿, 姚利晓, 陈善春.. 柑橘转基因成分多重PCR检测体系的建立 [J]. 安徽农业科学. 2012, 16: 8845-8849.
报/刊名：《安徽农业科学》，发表于2012 / 第 16 期。
文献类型： [J]
页码：第 8845-8849 页 / 共5 页