作者：吴小坝
摘要：体细胞胚胎发生是组织培养、遗传转化等技术中一种主要的形态发生途径，因此研究柑橘愈伤组织胚胎发生并建立高效胚胎发生体系是将生物技术应用于柑橘遗传改良的一个关键因子。多胺是一种强碱性、脂肪族多阳离子含氮化合物，在植物形态发生、生长发育及逆境应答中具有重要的作用。而多胺与柑橘离体胚胎发生的关系研究尚显不足，因此，本实验研究柑橘(伏今夏橙)胚胎发生中的多胺生物合成，主要结果如下： 1．培养基上诱导了伏令夏橙愈伤组织的体细胞胚胎发生，观察到10天就有一定数量的球形胚发生，20天有心形和鱼雷胚的发生，30天有子叶胚的发生。用多胺合成抑制剂(D-arginine和DFMO)处理会抑制胚的发育，并且明显的抑制子叶胚的形成，加外源腐胺后可以在一定程度上逆转抑制剂的作用。 2．石蜡切片显微观察了伏令夏橙不同时期的胚状体。观察到愈伤组织无序的细胞结构到有序的胚状体组织结构，心形胚可以看见明显的原形成层。 3．克隆了多胺合成中3个关键酶(ODC、SPMS和SPDS)的同源基因片段，其大小分别是鸟氨酸脱羧酶(ODC)522bp，亚精胺合成酶(SPDS)595bp，精胺合成酶(SPMS)307bp。 4．HPLC分析表明，培养在诱导培养基(MT＋2％甘油)上的胚性愈伤组织中的腐胺比对照(MT)低，亚精胺和精胺在前20天高，后20天与对照没有区别。用抑制剂(D-arginine和DFMO)处理后腐胺和亚精胺含量都降低，精胺有所增加。加外源腐胺后三种多胺含量都上升。 5．采用半定量RT-PCR分析了上述过程中多胺合成5个关键基因的表达，结果表明在体细胞胚胎发生过程中多胺合成酶的5个基因表达量增加。胚胎发育时期ADC、SAMDC、SPMS高表达。ODC检测不到表达、SPDS表达量较低。高浓度D-arginine能抑制ADC的表达，DFMO对ODC的抑制作用不大，SPDS在高浓度D-arginine处理时上升表达，其它基因变化不大。加外源腐胺后ODC上升表达，其它基因表达变化不大。
关键词：柑橘,多胺代谢,HPLC,基因表达,多胺抑制剂
文献注录：吴小坝. 柑橘体细胞胚胎发生过程中多胺变化及其合成基因的表达 [J]. . .
报/刊名：《》，发表于
文献类型： [J]
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