作者：张庆华
作者单位：华中农业大学
摘要：微融合(Microprotoplast fusion)是进行植物部分基因组转移的非对称融合新途径。获得高频率的微核是开展微融合的关键,而同步化的悬浮系有利于微核的分离。鉴于此,本研究旨在建立同步化的细胞系,尝试分离微核并建立分离体系,为今后开展微融合奠定基础。主要研究结果如下: 1.研究了国庆1号(Citrus unshiu 'Guoqing No. 1')、默科特橘橙(C. reticulata×C.sinensis)、锦橙(C.sinensis)三个品种的细胞周期,结果表明三种悬浮系在培养的8d时间里,第3-4d时悬浮系的G_2/M期细胞比例达到最高值,分别为25.46%、25.82%、25.56%。 2.以默科特橘橙悬浮系为材料,测定悬浮系培养8d的生长周期。结果表明,第3-4d时细胞生长最快,呈对数增长,与细胞周期相吻合。说明生长较快的愈伤组织建立的悬浮细胞系在第3-4d细胞分裂最快,处于指数生长期。 3.以国庆1号为材料进行细胞同步化处理的研究。分别用羟基脲(HU)、甲基氨草磷(APM)、及HU和APM双阻断三种方法处理国庆1号胚性悬浮系,研究其对细胞周期和有丝分裂指数的影响。HU处理对S期的细胞有富集作用,国庆1号用浓度为4mM或10mM HU处理24h时,其S期的细胞周期分别达到36.53%、37.51%;APM能将细胞周期阻断在G_2/M期,国庆1号用32μM APM处理24h,其G_2/M期的细胞周期达到25.73%;以4mM或10mM HU处理24h后再用32μM APM处理24h和4h时,胚性悬浮系的G_2/M期细胞比例和有丝分裂指数较高达到30%以上。上述结果表明,这三种方法都能起到同步化的作用。 4.测定了默科特橘橙、山金柑、来檬三个品种同步化处理后的细胞周期,发现三种悬浮系的G_2/M期细胞比例都达到30%以上,来檬的G_2/M期细胞比例最高,达到51.90%。说明不同品种同步化处理后其G_2/M期细胞的比例相差较大。 5.测定国庆1号和默科特橘橙同步化处理后的原生质体活力达到90%,与对照没有差异。以国庆1号同步化处理材料,进行微核化细胞学观察。结果表明,4mM或10mM HU处理24h后再用32μM APM处理4h和24h时,胚性悬浮系的细胞微核化比例均比对照高;在处理时间为24h时达到最高,分别为55.56%、61.54%。 6.观察国庆1号微核化原生质体的微核数,统计发现以4mM或10mM HU处理24h后再用32μM APM处理4h和24h时分离的微核化原生质体含有的微核较多,APM处理24h时每个原生质体含有的平均微核数最高,分别为8.9、9.3。 7.建立国庆1号微核分离体系,并且将分离的微核的大小和比例进行了统计。微核直径为小于5μM、5-10μM、10-20μM,其所占的比例分别为73.2%、17.5%、9.3%。
关键词：柑橘,微融合,细胞同步化,原生质体,微核
文献注录：张庆华. 柑橘同步化悬浮系建立及微原生质体分离 [J]. . 2005.
报/刊名：《》，发表于2005
文献类型： [J]
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