作者：刘真真
作者单位：浙江农林大学
摘要：柑橘是我国第二大果树，浙江省是我国柑橘主产区。面对激烈的市场竞争，提高柑橘果实品质，培育优良品种成为发展柑橘产业的关键。目前，关于柑橘果实品质形成的研究主要集中在糖酸代谢、色泽、贮藏保鲜、以及类胡萝卜素代谢等方面，对于果实成熟相关基因的研究报道并不多。研究果实成熟相关基因的表达及调控，对揭示果实成熟的分子机制及利用生物技术来提高果实品质均有十分重要的意义。前期研究获得了一个柑橘果实成熟特异表达基因CsPEMI-InvI，并构建了含有该目的基因的双元表达载体。本研究以矮化番茄品种Micro-Tom为试材，试优化番茄抗卡那霉素的遗传转化体系，获得了转化柑橘果实成熟特异表达基因CsPEMI-InvI的抗性植株，利用PCR以及qRT-PCR技术对抗性植株进行分子鉴定，最终确定CsPEMI-InvI基因已经整合到Micro-Tom番茄基因组中，并在番茄植株中稳定表达；以Micro-Tom番茄野生植株为对照，利用生物化学方法检测转基因植株叶片中果胶甲酯酶和转化酶的活性，初步确定了柑橘果实成熟特异基因CsPEMI-InvI的功能。主要研究结果概括如下： （1）通过筛选Kan和Cef的浓度、共培养时间、农杆菌浸染浓度及时间，试优化Micro-Tom番茄抗卡那霉素的遗传转化体系。根据优化的体系用柑橘果实成熟特异基因CsPEMI-InvI转化Micro-Tom番茄。切取苗龄10d左右的Micro-Tom番茄子叶和下胚轴为外植体，农杆菌菌液浓度OD_(600)=0.5~1.0之间，MS稀释菌液OD_(600)=0.1，将外植体放在OD_(600)=0.1的农杆菌菌液中浸染20min，接种到不含抗生素的培养基中共培养2d；共培养后的外植体转移至Kan浓度为100mg.L~(-1)，Cef浓度为400mg.L~(-1)的培养基中进行筛选，最终得到17株转基因植株。 （2）以Micro-Tom番茄野生植株为对照，利用PCR及qRT-PCR技术对抗性植株进行检测，结果表明CsPMEI-InvI基因已成功整合到Micro-Tom番茄基因组中，并在番茄叶片中稳定表达。 （3）以Micro-Tom番茄野生植株作为对照，利用生物化学方法检测转基因植株叶片果胶甲酯酶和转化酶的活性。结果表明：转基因植株叶片果胶甲酯酶活性明显低于野生番茄植株叶片，差异呈极显著；而酸性转化酶活性两者无显著性差异。综上，CsPMEI-InvI可初步确定为果胶甲酯酶抑制子基因。
关键词：柑橘,果实成熟,Micro-Tom番茄,遗传转化体系,果胶甲酯酶抑制子
文献注录：刘真真. 柑橘果实成熟特异基因CsPEMI-InvI转化番茄的研究 [J]. . 2013.
报/刊名：《》，发表于2013
文献类型： [J]
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