作者：李艳婷
摘要：柑橘鲜果周年供应、丰富早晚熟柑橘品种是我国柑橘产业重点研究内容之一。由于柑橘童期长,且常规育种手段效率极低,因此利用分子技术进行柑橘熟期育种成为了重要的育种手段,解析柑橘果实成熟调控分子机理对柑橘产业的发展具有重要的研究意义和应用价值。前人对转录因子Cs MYB77(Cs3g23950)遗传转化番茄,初步确定该基因具有延迟果实成熟的功能。本研究在此基础上,对Cs MYB77遗传转化山金柑,进行q RT-PCR分析、双分子荧光互补和双荧光素酶等互作验证实验,确定转录因子Cs MYB77的下游靶基因,进一步阐释了该转录因子调控柑橘果实成熟的分子机制,为柑橘的熟期育种提供一定的理论基础。主要结果如下:1.对Cs MYB77超表达遗传转化番茄株系T3代进行表型观察与统计,果实破色期比野生型(WT)和空载对照组(Control)延迟了3-5天,经过3代观察,Cs MYB77超表达番茄株系延迟果实成熟性状稳定。对番茄ARFs家族基因进行q RT-PCR实验,结果显示基因Sl ARF6与番茄果实破色相关,基因Sl ARF8与Sl ARF14上调表达明显。2.将Cs MYB77-OE、Cs MYB77-CRISPR、超表达空载p BI 121遗传转化山金柑,其中,超表达株系共获得6株阳性苗,阳性率约为5.6%;CRISPR株系共获得3株阳性苗,空载p BI 121共获得2株阳性苗,阳性率分别为16.6%和15.4%。对Cs MYB77超表达山金柑株系T0代进行表型观察,结果显示,山金柑超表达株系相对于野生型(WT)呈现出植株矮化、晚花晚果等性状。q RT-PCR结果表明,超表达株系Fh MYB77的表达水平相对于野生型(WT)提高12-16倍,且ARF家族基因Fh ARF6与Fh ARF14差异表达明显。在Cs MYB77-CRISPR与野生型(WT)山金柑株系中,基因Fh MYB77、Fh ARF6、Fh ARF 8则呈现不同程度的下调表达。3.对Cs MYB77与Cs ARF6、Cs ARF17进行双荧光素酶互作验证实验,烟草叶片活体成像结果显示实验组与对照组无明显的差异,即Cs MYB77与这两个基因不存在互作。对柑橘ARFs家族的19个基因顺式作用元件进行预测,发现基因Cs ARF5、Cs ARF8和Cs ARF18启动子区域含有MBS1 motif(Cs MYB77结合位点);对Fh MYB77与Fh ARF5、Fh ARF8、Fh ARF18分别进行双荧光素酶实验,结果表明Fh MYB77可能通过结合到基因Fh ARF8启动子上进而影响柑橘果实的成熟。
关键词：柑橘; 转录因子; MYB77; ARFs; 果实成熟
文献注录：李艳婷. 转录因子CsMYB77遗传转化功能验证及其互作基因挖掘 [J]. . 2020.
报/刊名：《》，发表于2020
文献类型： [J]
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