作者：贝学军,钟广炎
摘要：以伏令夏橙叶片中分离的总RNA为模板,经RT-PCR扩增到一条约600bp、含钙离子结合蛋白基因(CsCaBP)的片段,将此片段克隆到pMD-19T中,经测序分析该片段与甜橙基因组中的对应序列完全吻合。设计2对带有限制性内切酶位点的特异性引物,以cDNA为模板扩增到2个CsCaBP片段,并连接到TA克隆载体pMD-19T上;经双酶切消化后,分别以正反2个方向插入到植物表达载体pFGC5941的查耳酮合成酶(CHSA)内含子两侧,构建成功CsCaBP的RNA干扰载体,但未获得转基因植株。将CsCaBP的正向片段定向克隆到具有CaMV35S启动子的pF-GC5941表达质粒上,构建成功CsCaBP过量表达载体。将构建好的表达载体导入根癌农杆菌LBA4404菌株,转化酸橙下胚轴,经PCR检测,获得9株过量表达转基因植株,荧光定量PCR验证发现目的基因在转基因植株中有不同程度的表达。
关键词：柑桔; 钙离子结合蛋白基因; 基因克隆; 遗传转化
文献注录：贝学军,钟广炎. 柑桔钙离子结合蛋白基因克隆及植物表达载体构建 [J]. 中国南方果树. 2012, 03: 6-11.
报/刊名：《中国南方果树》，发表于2012 / 第 03 期。
文献类型： [J] （文献级别：核心刊物）
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