作者：曾凡凡
作者单位：华中农业大学
摘要：启动子是基因表达调控的重要元件,在植物转基因表达载体所选择的启动子中,应用最为广泛的是组成型启动子,如Ca MV 35S。然而组成型启动子会导致目的基因产物在整个植株大量积累,可能会影响植株的其他组织器官的正常生长发育,从而可能导致死亡。而组织特异性启动子(如根、茎、花、果特异表达启动子)可以将目的基因特异的表达于目标器官或组织,一方面避免基因的组成型表达对其他组织器官生长发育的影响,从而更好的进行基因功能验证,另一方面,也能够更具有目的性的在某个特定组织器官特异性高效表达,进行高效地转基因育种。本研究基于柑橘基因组RNA-seq数据,用各个不同组织器官材料进行实时荧光定量验证,筛选出几个柑橘果实特异性启动子,并开展了转基因验证工作。本实验具体从以下几个方面获得结果:1)根据全基因组RNA-seq数据的分析,筛选得到果实中特异性高表达的七个基因。通过实时定量PCR对七个基因的表达模式进行了分析,筛选到了一个在果实中表达水平远高于(高低110倍)叶片和花的基因。2)启动子的克隆与表达载体构建。克隆得到p Cit PDILP启动子,该启动子长1913bp;利用PMV2-DR5载体构建p Cit PDILP启动子的GUS融合表达载体和一个阳性对照35S启动子的GUS融合表达载体;PMV2-DR5同时拥有GUS和YFP两种报告基因;3)瞬时表达验证启动子的果实特异性。用农杆菌渗入瞬时转化的方法,将带有p Cit PDILP启动子的载体和带有35S启动子的载体分别转入了番茄;载体的可用性以及目标启动子的果实特异性通过GUS染色得到初步鉴定;4)农杆菌介导的早实枳转化。通过农杆菌介导转化法将带有p Cit PDILP启动子的GUS融合表达载体转入早实枳,为该启动子在柑橘的表达特性鉴定和遗传改良奠定基础。总之,本实验旨在筛选并鉴定柑橘中高效的果实特异性启动子,为柑橘果实品质相关基因的功能验证和转基因进行果实品质育种奠定坚实的理论基础。
关键词：柑橘 ,高表达,果实特异性启动子, 载体构建
文献注录：曾凡凡. 柑橘果实特异性启动子的克隆与鉴定 [J]. . 2015.
报/刊名：《》，发表于2015
文献类型： [J] （文献级别：其他刊物）
页码：第 页 / 共 页