作者：冯鹄竣
作者单位：湖南农业大学
摘要：沙田柚(Citrus grandis var.shatinyou Hour)是芸香科柑桔属中著名的柚类良种，在我国栽培历史悠久，品种繁多，栽种范围广，面积大，年产量1866985吨，远销东南亚，但由于其种子多，平均每个果实种子数约为120多粒，严重影响了其商品价值和在国际市场上的竞争能力；此外，沙田柚树体高大，不便管理，生产成本较高。因此，增加无核和矮化性状已成为沙田柚遗传改良的重要研究课题。本文以沙田柚为应用研究对象，通过对离体再生条件、抗生素筛选条件以及根癌农杆菌介导沙田柚遗传转化条件的优化，建立了高效的离体再生系统和遗传转化体系，并将DefH9-iaaM5无核基因和Rol ABC矮化基因导入沙田柚，对转化植株进行了分子检测，主要研究内容及结果如下： 1．研究了外植体的离体再生系统。建立了沙田柚无菌苗繁殖体系，并对外植体不定芽再生能力以及基本培养基、6-BA浓度、激素组合和活性碳等因素对上胚轴不定芽再生能力的影响进行了比较，筛选出沙田柚上胚轴为离体再生体系最佳外植体，其分化不定芽的适宜培养基为MS+3mg•L~(-1) 6-BA。 2．通过卡拉霉素敏感性试验，确定了沙田柚上胚轴外植体不定芽诱导的卡拉霉素临界耐受浓度为75mg•L~(-1)，同时研究了头孢霉素(Cef)和羧苄青霉素(Cb)对沙田柚上胚轴不定芽芽诱导和农杆菌抑菌效果的影响，发现两种脱菌剂浓度超过500mg•L~(-1)时对上胚轴外植体不定芽的诱导有抑制作用，而且随着浓度升高抑制程度加大。抑菌试验表明，Cef对EHA105和C85菌株的抑菌效果比Cb好，适宜的脱菌浓度为500mg•L~(-1)。 3．通对影响农杆菌转化效率几个主要因素进行的研究发现，沙田柚上胚轴外植体在侵染前预培养2d、农杆菌侵染时浓度OD_(600)值为0.5、侵染15min、侵染后共培养2～4d可获得较好的转化效果，在共培养基中附加200μmol•L~(-1)乙酰丁香酮对转化效果无明显的影响。 4．将通过共培的上胚轴在MS+3mg•L~(-1) 6-BA+75mg•L~(-1) Kan+500mg•L~(-1) Cef筛选培养后的抗性芽，利用茎尖微芽嫁接的方法，嫁接到卡里佐枳橙上成苗，目前在温室生长良好。经过PCR扩增检测，获得31株转DefH9-iaaM5基因植株和9株转Rol ABC基因植株，转化率分别为1.73％和3.19％。
关键词：沙田柚；DefH9-iaaM5基因；Rol ABC基因；再生系统；根癌农杆菌；遗传转化
文献注录：冯鹄竣. 用DefH9-iaaM5基因和Rol ABC基因转化沙田柚的研究 [D]. . 2007.
报/刊名：《》，发表于2007
文献类型： [D]
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