作者：李秋景
作者单位：华中农业大学
摘要：柠檬作为世界第一大果树——柑橘的重要的类型,不仅具有很高的食用价值,而且在基础研究方面有着极高的研究价值。利用短童期的种质资源以加快研究进程,一直是柑橘分子生物学研究的重要课题。而短童期的柠檬是柑橘遗传转化的优良材料。本研究利用根癌农杆菌介导法,以早花柠檬和四倍体费米耐劳柠檬上胚轴为外植体,以绿色荧光蛋白基因(GFP)为目的基因,进行遗传转化,最终获得了纯合的GFP稳定表达的阳性苗。主要结果如下:1.早花柠檬上胚轴切段转化GFP基因,共转化上胚轴4批,1699个茎段,平均生芽率为67.0%。生芽筛选培养后,经体视荧光显微镜鉴定,共有33个阳性芽,转化率为1.94%。第一批转化获得的8个转化子生根诱导3个月仍未生根,微芽嫁接后未成活,表明早花柠檬生根难度较大。后3批已鉴定的阳性芽目前处于伸长阶段。2.四倍体费米耐劳柠檬上胚轴切段转化GFP基因,共转化上胚轴9批,5131个茎段,平均生芽率为64.4%。经荧光显微镜检测,共有290个再生芽有GFP表达,转化率为5.65%。后期生根培养后获得42株转基因植株,生根率为50%。四倍体柠檬转化率和生根率在常规操作下,远高于其他适于转基因的柑橘品种,四倍体柑橘可能成为柑橘高效遗传转化的新型外植体。早花柠檬转化率高于实验室常用的转基因材料,如山金柑、枳、椪柑等,在提高早花柠檬生根率的前提下,可作为柑橘功能基因组研究的优良材料。
关键词：早花柠檬 费米耐劳柠檬 根癌农杆菌 绿色荧光蛋白 四倍体
文献注录：李秋景. 早花柠檬和四倍体柠檬转GFP基因新种质的创制 [D]. . 2015.
报/刊名：《》，发表于2015
文献类型： [D]
页码：第 页 / 共35 页